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Tatiana Rodrigues de Moura COORDENADOR(A)

Ciências Biológicas

Imunologia

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Título do Projeto: investigar o papel do trem na infecção por l. infantum
Resumo: A leishmaniose visceral (LV) afeta de forma considerável a população mundial, constituindo um grande impacto na saúde pública. O Brasil concentra 96% dos casos de LV das Américas e, apesar dos esforços para o controle da doença, dos anos 2000 a 2016, a letalidade aumentou de 3,2% para 7,4%. Em Sergipe, em 2016 foi observado 20,4% de letalidade na LV (BRASIL, 2017). Para a redução da transmissão e da morbimortalidade no Brasil, o Programa de Vigilância e Controle da LV do Ministério da Saúde, recomenda o aperfeiçoamento dos procedimentos diagnósticos e a disponibilidade oportuna de medicamentos (BRASIL, 2014). A identificação precoce dos pacientes que poderão evoluir com gravidade é de fundamental para redução da letalidade. Os pacientes com LV apresentam imunossupressão e uma forte resposta inflamatória sistêmica com capacidade limitada de controle de replicação dos parasitas. Mecanismos relacionados à desregulação da resposta inflamatória e vias de morte de células de defesa imune podem estar envolvidos na patogênese e prognóstico da LV (QUINTELA-CARVALHO et al., 2017). O reconhecimento dos patógenos é o primeiro passo para o desenvolvimento de uma reposta imunológica. Neste sentido, células da imunidade inata expressam vários receptores de superfície celular e moléculas de sensoriamento intracelulares que permitem o reconhecimento autônomo de padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs), que dão início à reposta pró-inflamatória contra antimicrobianos (WEBER et al., 2014). Receptores Toll-like (TLR) e Node-like (NLR), que reconhecem um grupo diverso de estruturas microbianas altamente conservadas, representam dois grandes exemplos de receptores da imunidade inata com funções de ativação (ABBAS, LITCHAMAN, PILAI, 2008). Contudo, no ano de 2000, Bouchon, Dietrich; Colonna identificaram um novo grupo de receptores da imunidade inata, conservado evolutivamente, sendo chamados de Triggering Receptor Expressed Myeloid Cells (TREM) (BOUCHON; DIETRICH; COLONNA, 2000). Desde então, este grupo de receptores vem sendo estudado e caracterizado. A ativação do TREM-1 tem se destacado em pesquisas recentes, e, resulta na produção de uma variedade de citocinas pró-inflamatórias que amplificam a resposta imune inata e adaptativa (BOUCHON, et al., 2000; WEBER et al., 2014). O TREM-1 promove a resposta inflamatória às bactérias e ao lipopolissacarídeo do ligante TLR4 (LPS), atua em sinergismo com TLR2 e TLR4. Em contraste, o TREM2 e o TREML1 suprimem os sinais induzidos por TLR e protegem contra a autoimunidade (GUERREIRO et al., 2013; JONSSON et al., 2013; WASHINGTON et al., 2009). Os ligantes para os receptores TREM permaneceram em grande parte desconhecidos; no entanto, vários relatórios sugerem que os receptores TREM podem se ligar a moléculas microbianas e hospedeiras. O TREML4 se liga a células apoptóticas e necróticas tardias , enquanto o TREM1 e o TREM2 reconhecem ligantes aniônicos de bactérias (HEMMI et al., 2009; NDIAYE et al., 2009). O TREM-1 é um receptor de superfície celular constitutivamente expresso em neutrófilos e monócitos e desempenha um papel fundamental na resposta imune inata, sendo capaz de amplificar e regular a resposta inflamatória. Adicionalmente, o TREM-1 pode ser produzido na sua forma solúvel (sTREM-1), o qual pode ser utilizado como um biomarcador indireto de inflamação sistêmica, concentrações elevadas de sTREM-1 foram detectadas em pacientes com infecções, enquanto um declínio sérico de sTREM-1 indicou evolução clínica favorável do choque séptico, o que sugere que a forma solúvel regula negativamente a ativação do TREM-1 por competir com os ligantes do TREM-1 (GIBOT et al., 2004, 2007; JEDYNAK et al., 2017). Em dados recentes publicados pelo nosso grupo, níveis séricos elevados de sTREM-1 foram associados a gravidade em pacientes com LV, vimos, ainda, que neutrófilos infectados com L. infantum apresentam a liberação de sTREM-1 correlacionada com aumento da carga parasitária (BOMFIM et al., 2017). Em pacientes com LV foi observado a redução deste receptor na superficie de neutrofilos . Por outro lado, a inibição farmacológica da apoptose de neutrófilos induz a morte inflamatória durante a infecção por L. infantum, o que pode esta favorecendo a disseminaçao do parasita e a intensa inflamação (QUINTELA-CARVALHO et al., 2017. Recentemente, foi demonstrado que a sinalização da via TREM-1 em infeções por HIV, inibe a apotose da celula infectada, favorecendo a permanência do virus. Além disso a via do TREM-1 upregula o RNA de interferência mir-155, que é alvo do suppressor of cytokine signaling-1 (SOCS-1), diminuindo a ativaçõa de macrofagos (YUAN,et al.,2016). Nesta proposta, pretendemos avaliar se a via do TREM -1 é importante para o estabelecimento da leishmania em neutrófilos e macrófagos, modulando a resposta microbicida , e, se esta a modulação da via do TREM-1 pela Leishmania esta associada aos mecanismos de morte celular inflamatório. Os resultados obtidos poderão auxiliar na identificação de moléculas relacionadas a gravidade da LV, lançando uma nova luz na compreensão de como as respostas inflamatórias inatas são reguladas, abrindo perspectivas para novos alvos para desenvolvimento de procedimentos diagnósticos, novas abordagens imunoprofiláticas e imunoterapêuticos na LV ,que beneficiarão as populações de áreas endêmicas, no que diz respeito ao controle e tratamento da doença.
Instituição/UF/País: Universidade Federal de Sergipe - SE - Brasil
Vigência: 18/02/2019-28/02/2022

Tatiana Schor COORDENADOR(A)

Ciências Humanas

Geografia

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Título do Projeto:da metrópole na selva a região metropolitana: diagnóstico do perfil urbano dos municípios da região metropolitana de manaus - amazonas.
Resumo: A Região Metropolitana de Manaus, foco deste estudo, foi criado em 2007. Em um primeiro momento foi constituída com 7 municípios e atualmente é composta por 13 municípios limitrofes a capital Manaus. Ocupa um território de 127.170 km2, característica espacial que implica em distancias muitas vezes maiores que diversos países. Apesar de ter mais de 10 anos ainda tem-se poucos estudos sobre a articulação entre os municipios que compõem a RMM. Assim sendo esta proposta de pesquisa visa realizar um diagnóstico do perfil urbano dos municípios da RMM, elaborar uma tipologia e contribuir para a discussáo sobre este recorte espacial na academia e subsidiar políticas relativas a implantação da RMM. Para alcançar estes objetivos a proposta está dividida em Etapas que apresentam metas específicas e produtos a serem elaborados, sintetizados abaixo: Etapa 1 _ Coleta de Dados_Perfil Urbano. META 1: Construção de uma tipologia urbana da RMM. Produto 1: Relatório parcial de pesquisa contendo os resultados obtidos na Etapa 1. Etapa 2_ Produção de Material Técnico Científico. META 2: Produção de Material didático e de comunicação. Produto 2: Um Atlas do Perfil Urbano da Região Metropolitana de Manaus. Etapa 3_ Comunicação e Capacitação de Recursos Humanos. META 3: Capacitação de recursos humanos na esfera municipal e estadual. META 4: Capacitação de recursos humanos na UFAM, UEA, SIPAM e FVA. Produto 3: Material a ser utilizado nos Cursos de Formação de Observadores da RMM; Produto 3b: Relatório de Finalização dos Cursos de Formação de Observadores da RMM por município. Para que se realize estas etapas este projeto conta com a parceria de duas universidades, Universidade Federal do Amazonas e a Universidade do Estado do Amazonas, uma ONG Fundação Vitoria Amazônicae o Centro Gestor e Operacional do Sistema de Proteção da Amazônia (CENSIPAM. Espera-se contribuir com o conhecimento da Região Metropolitana de Manaus, capacitar pessoal técnico nos municípios e recursos humanos na UFAM e UEA, e subsidiar políticas adequadas para o desenvolvimento sustentável da região, em especial, na formulação do Plano de Desenvolvimento Urbano Integrado da Região Metropolitana de Manaus.
Instituição/UF/País: Universidade Federal do Amazonas - AM - Brasil
Vigência: 18/02/2019-28/02/2022

Tatiana Wargas de Faria Baptista COORDENADOR(A)

Ciências da Saúde

Saúde Coletiva

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Título do Projeto:análise da participação da sociedade civil no processo de construção da política nacional de saúde dos homens
Resumo: Este projeto tem como objetivo analisar o processo de construção da Política Nacional de Saúde dos Homens no Brasil com destaque à participação da sociedade civil. Para aproximação ao objeto de pesquisa, fez-se, inicialmente, um levantamento em três (3) bases de dados Biblioteca Virtual em Saúde (BVS), Scopus e Web of Science para identificar o Estado da Arte sobre o tema da pesquisa e para entender como, no cenário acadêmico, a política de saúde para homens estava ou está sendo abordada. Além disso, foi realizado um pré-campo no qual foram identificadas pessoas que estiveram ou estão envolvidas com a política de saúde dos homens. Realizou-se também leituras sobre as características do governo brasileiro no que se refere ao setor saúde no momento correspondente à divulgação e construção do documento Poliítca Nacional de Atenção Integral à Saúde do Homem, assim como uma pesquisa no site do Senado Federal, para nos permitir caracterizar e compreender a influência do Legislativo no processo da política em questão. Como proposta metodológica, temos a intenção de realizar uma pesquisa de base qualitativa pela perspectiva das ciências sociais. Assim, iremos entrevistar aqueles que estão envolvidos com a construção da política de saúde dos homens visando identificar os discursos e como ocorreu o processo de participação da sociedade civil. Além de entrevistas, a análise de documentos oficiais, vídeos e outras mídias que forem encontradas, poderão compor o material de pesquisa a ser explorado. Como referencial teórico, nos apoiaremos na discussão feita por Bowe, Ball e Gold (1992), Ball (2008) quanto ao conceito de política e na teoria da ação e da reprodução de Pierre Bourdieu, além da discussão sobre o Estado. Além desses autores nos apoiaremos em Foucault (1996) para a compreensão sobre discurso e outros para a discussão de participação social e democracia.
Instituição/UF/País: Fundação Oswaldo Cruz - RJ - Brasil
Vigência: 01/06/2017-31/05/2021

Tatiane Alves da Paixão COORDENADOR(A)

Ciências Agrárias

Medicina Veterinária

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Título do Projeto:desenvolvimento vacinal contra listeriose em modelo animal
Resumo: Listeriose é doença infecciosa zoonótica transmitida por alimentos causada pela Listeria monocytogenes. Bovinos, ovinos e caprinos acometidos podem apresentar clinicamente a listeriose neurológica, doença fatal associada a sinais neurológicos graves decorrente de abscessos no tronco encefálico, ou listeriose materno-fetal caracterizada pela ocorrência de aborto no final da gestação. No homem, doença caracteriza-se por manifestações diversas sendo a forma neurológica, observada principalmente em imunossuprimidos e idosos; e forma materno-fetal, causando abortos, natimortos ou septicemia em recém-nascidos, as duas formas mais graves da doença. A vacinação é uma das estratégias de maior sucesso e custo-benefício quando se trata de controle de doenças infecciosas. Não existe nenhuma vacina comercial disponível contra a infecção por L. monocytogenes para ruminantes ou seres humanos. Considerando maior susceptibilidade de indivíduos e animais imunocomprometidos a listeriose, vacinas de subunidades ou vacinas inativadas são consideradas mais seguras por não conter o micro-organismo vivo, desde que induzam resposta imune celular protetora do tipo Th1. Para atingir a meta do projeto de desenvolvimento vacinal contra listeriose, este projeto propõe testar diferentes composições vacinais incluindo uma vacina inativada baseada em L. monocytogenes gamma-irradiada associada a diferentes adjuvantes como alginato e quitosano e uma vacina inédita constituída de uma proteína quimérica recombinante baseada em epitopos preditos para MHCI e MHCII de proteínas sabidamente imunogênicas de L. monocytogenes em modelo murino e modelo gerbil. Buscamos com as vacinas propostas a indução de uma resposta imune celular contra os antígenos vacinais após desafio com L. monocytogenes, e uma resposta protetora caracterizada pela redução da infecção e ausência da manifestação clínica da doença nos modelos experimentais. Este projeto possui clara relevância para desenvolvimento científico, tecnológico ou de inovação no campo de estudo. Com este projeto será possível ampliar o conhecimento controle de infecção por L. monocytogenes utilizando dois modelos animais. Por se tratar de uma vacina inovadora de proteína quimérica baseada em epitopos preditos de proteínas sabidamente imunogênicas, existe grande potencial de depósito de patente ou know how caso resultados sejam promissores. A longo prazo, a vacina poderá ser comercializada com intuito de reduzir a ocorrência de listeriose neurológica ou materno fetal em ruminantes. Além disso, os resultados fornecerão subsídios para uma publicação científica de artigo científico e divulgação dos resultados em evento científico, o que representam benefícios diretos para sociedade. Em paralelo, deste projeto possibilitará a formação, treinamento e desenvolvimento de censo crítico científico de alunos de pós-graduação e graduação envolvidos no projeto e ainda tem o potencial de gerar novos projetos futuros fortalecendo a linha de pesquisa e maior inserção da coordenadora na pós-graduação e consequentemente formação continuada de recursos humanos altamente qualificados.
Instituição/UF/País: Universidade Federal de Minas Gerais - MG - Brasil
Vigência: 18/02/2019-28/02/2022

Tatiane Combi COORDENADOR(A)

Ciências Exatas e da Terra

Oceanografia

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Título do Projeto:utilização de amostradores passivos para determinação de contaminantes emergentes e poluentes orgânicos persistentes na baía de todos os santos, ba
Resumo: O uso de produtos químicos potencialmente perigosos para o ambiente (incluindo poluentes orgânicos persistentes (POPs), contaminantes emergentes, entre outros) em grandes quantidades e variedade ameaça as águas, os sedimentos e a biota. A presença de uma gama tão ampla de compostos no ambiente resulta em interferências durante a realização de análises químicas, prejudicando a avaliação da ocorrência e distribuição de contaminantes em matrizes ambientais. Desta maneira, o desenvolvimento e a otimização de métodos de amostragem e métodos analíticos capazes detectar diversas classes de compostos em níveis muito baixos está entre as questões mais complexas e atuais na área da química ambiental, especialmente em países menos desenvolvidos como o Brasil. O desenvolvimento dessas metodologias é essencial para a avaliação dos níveis de contaminação e risco ambiental em áreas costeiras e marinhas. Essa proposta pretende implementar um método de amostragem passiva para análise de contaminantes emergentes e poluentes orgânicos persistentes na Baía de Todos os Santos (BTS), BA - Brasil. A metodologia analítica para análise concomitante dos contaminantes selecionados também será otimizada e implementada. Adicionalmente, pretende-se avaliar a ocorrência, variações espaço-temporais e as fontes potenciais dos contaminantes em áreas de interesse na BTS, bem como contribuir com dados inéditos para os inventários regionais e globais.
Instituição/UF/País: Universidade Federal da Bahia - BA - Brasil
Vigência: 18/02/2019-28/02/2022

Tatiane de Andrade Maranhão COORDENADOR(A)

Ciências Exatas e da Terra

Química

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Título do Projeto:desenvolvimento de métodos para determinação de constituintes inorgânicos em amostras ambientais por técnicas espectrométricas: avaliação das legislações vigentes
Resumo: O presente projeto tem como finalidade o desenvolvimento de métodos analíticos simples e rápidos, envolvendo extração e pré-concentração de constituintes inorgânicos (metais e não metais) em amostras de interesse ambiental (águas naturais, residuais e produzidas), assim como resíduos de processos industriais submetidos ao processo de classificação conforme ABNT NBR 14000:2004, e posterior quantificação empregando técnicas espectrométricas. Serão usados métodos de preparo de amostras que consideram a extração e pré-concentração baseado nos fenômenos de ponto nuvem (CPE), microextração líquido líquido dispersiva (DLLME) e microextração líquido líquido dispersiva de fase reversa (RP- DLLME) com a finalidade de melhorar limites de detecção, separação dos analitos da matriz e minimização de interferências comuns em análise química das amostras ambientais. As concentrações dos elementos encontrados serão avaliadas conforme parâmetros de valores máximos permitidos da Legislação Brasileira vigente para cada tipo de amostra. Serão aplicadas técnicas de planejamento experimento simultâneo de dois e três níveis, com o intuito de reduzir e otimizar os experimentos. Os resultados obtidos serão avaliados através de técnicas multivariadas de dados, tais como análise de componentes principais (PCA) e a análise de agrupamento hierárquica (HCA) para identificar tendências no conjunto de dados gerados.
Instituição/UF/País: Universidade Federal de Santa Catarina - SC - Brasil
Vigência: 01/06/2017-31/05/2021

Tatiane Maria Rodrigues COORDENADOR(A)

Ciências Biológicas

Botânica

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Título do Projeto:influência do excesso de metais tóxicos em aspectos estruturais e bioquímicos de cuphea calophylla cham. & schltdl. (lythraceae) com ênfase no sistema secretor
Resumo: Áreas rurais envolvidas com a atividade agropecuária se destacam por apresentar solos contaminados com excesso de metais tóxicos como Cobre (Cu) e Zinco (Zn). Em baixas concentrações Cu e Zn são micronutrientes essenciais para as plantas, porém, em excesso podem causar alterações na estrutura e funcionamento vegetal. Cuphea calophylla (Lythraceae) é facilmente encontrada em áreas ruderais e ambientes antropizados. É popularmente utilizada no tratamento de hipertensão e os óleos produzidos em seus tricomas glandulares são fontes de matéria-prima para produção de sabão. Nosso objetivo é analisar a influência do excesso de Cu e Zn em aspectos morfológicos e bioquímicos em folhas de C. calophylla com ênfase no desenvolvimento e funcionamento do sistema secretor. Serão amostrados indivíduos de populações ocorrentes em área preservada e área contaminada com excesso de Cu e Zn. Ainda, indivíduos serão submetidos a altas concentrações de Cu e Zn em condições hidropônicas. Para análise do efeito dos metais tóxicos na anatomia foliar, análises serão realizadas ao microscópio de luz. Amostras de limbo foliar serão analisadas em microscopia eletrônica de varredura (MEV) convencional para análise da densidade do sistema secretor e em MEV com espectroscopia de energia dispersiva para quantificação dos elementos metálicos nos tecidos vegetais. Alterações celulares no mesofilo e nos tricomas glandulares serão investigadas ao microscópio eletrônico de transmissão. A composição química dos óleos essenciais será analisada por hidrodestilação. O nível de estresse oxidativo será determinado por quantificação de H2O2 e através dos níveis de peroxidação lipídica. Considerando o aumento de solos contaminados por fertilizantes e pesticidas no Brasil, nossos resultados poderão fornecer informações para manejo de espécies e gerar subsídios para predições dos efeitos de ações antrópicas na estrutura dos vegetais.
Instituição/UF/País: Universidade Estadual Paulista Júlio de Mesquita Filho - SP - Brasil
Vigência: 18/02/2019-28/02/2022

Tatianne Ferreira de Oliveira COORDENADOR(A)

Ciências Agrárias

Agronomia

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Título do Projeto:utilização de energia solar no tratamento de poluentes emergentes presentes em efluentes agrícolas e agroindustriais
Resumo: Os efluentes aquosos originários de vários tipos de indústrias como a alimentícia, possuem substâncias que na maioria das vezes as Estações de Tratamento não foram projetadas para eliminá-los e sim reduzir em matéria orgânica e nutriente e não promovem a remoção e sua completa mineralização. Diversos estudos quantificaram estes compostos em rejeitos industriais, domésticos e até em água tratada (OLIVEIRA, 2011; ANDRADE, 2011). Entre estes compostos estão os micropoluentes emergentes ftalatos, que podem promover impactos adversos na saúde do homem por interferir no funcionamento normal do sistema endócrino (KIM, 2007; ABDELMELEK, 2011) por sua ação cancerígena, mutagênica, além de causar anormalidade no sistema reprodutivo. Poluentes orgânicos emergentes (POEs) referem-se a qualquer composto químico presente em produtos comerciais, como medicamentos, embalagens de alimentos, produtos de higiene, agrotóxicos, etc., que não são usualmente monitorados, ou ainda não possuem legislação regulatória correspondente em muitos países, mas apresentam risco potencial à saúde humana e ao meio ambiente (LA FARRE et al., 2008; KUSTER et al., 2008). A evidência dos efeitos tóxicos destas substâncias é causa de grande preocupação e a legislação nacional tem estabelecido algumas restrições. A Comunidade Europeia, como medida preventiva, classificou os ftalatos como substância perigosa prioritária e determinou a redução de 30% destes micropoluentes nos efluentes industriais aquosos, sendo que atualmente a concentração de ftalatos é de 1,3 μg L-1 nos corpos de água (OLIVEIRA, 2011). Nos últimos anos, contudo, têm sido aplicados estudos comparativos da eficiência de Processos Oxidativos Avançados (POAs) como uma forma de solucionar as falhas nos tradicionais tratamentos, posto que nestes haja mineralização da grande maioria dos contaminantes orgânicos (SILVA et al., 2009). Os POAs podem ser influenciados por alguns fatores importantes do ponto de vista cinético: pH, temperatura, concentração do catalisador e do efluente. Há uma promissora aplicação destes POAs combinados com utilização de luz solar como uma alternativa de tratamento do ponto de vista econômico, pelo fato de fornecer energia ao processo, dando sustentabilidade agroindustrial. Vale destacar, que o uso da luz solar implica em uma Produção Mais Limpa já que diminui o descarte de lâmpadas de mercúrio, aumentando a eficiência quanto ao uso de energia com benefícios econômicos e ambientais. Neste contetxo, a identificação de processos mais limpos para a remoção de contaminantes existentes em águas residuárias se constitui em sério problema em diversas indústrias. Os tratamentos podem ser divididos, em dois grupos: i) os físico-químicos, baseados na transferência de fase; e ii) os processos oxidativos, baseados na decomposição do poluente. Oliveira (2011) afirmam que nos métodos de transferência são obtidas duas fases: uma composta pela água limpa e outra pelo resíduo concentrado. Entre estes processos, podem ser citados: precipitação, coagulação/floculação, osmose reversa, destilação e evaporação, dentre outros. A vantagem dos processos oxidativos é a degradação do poluente levando à eliminação ou redução da toxicidade. Neste contexto, propõe-se neste projeto o Desenvolvimento e Implantação de um Piloto de Tratamento de Processo Oxidativo Avançado em efluentes agroindustriais/agrícolas utilizando a Energia Solar, visando a redução e mineralização de poluentes emergentes, principalmente os micropoluentes ftalatos.
Instituição/UF/País: Universidade Federal de Goiás - GO - Brasil
Vigência: 18/02/2019-28/02/2022

Tatianny Soares Alves COORDENADOR(A)

Engenharias

Engenharia de Materiais e Metalúrgica

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Título do Projeto:plasticultura sustentável: desenvolvimento de filmes poliméricos biodegradáveis
Resumo: O descarte indevido de resíduos poliméricos vem causando diversos problemas ambientais, uma vez que a maioria dos polímeros utilizados demoram centenas de anos para se decompor, tendo como consequência o acúmulo no meio ambiente e as respectivas problemáticas. Um dos setores que mais consome produtos a base de materiais plásticos, e que pode contribuir para o acúmulo desse tipo de resíduo, é o agrícola com uma média superior a 6 milhões de toneladas consumidas todos os anos na confecção de produtos como estufas, sacos para produção de mudas e na cobertura de solo. Como uma alternativa às dificuldades da utilização de coberturas plásticas convencionais, o uso de filmes plásticos biodegradáveis é apresentado como promissora, uma vez que estes podem ser incorporados no solo ao final do período de colheita e sofrem processo de biodegradação. Nesse contexto, este projeto de pesquisa propõe desenvolver mulch films a base de polímeros biodegradáveis (PBAT e Ecovio®), resíduo de cana-de-açúcar, cera de carnaúba. Os mulch films serão avaliados frente as demandas exigidas para a respectiva aplicação em solos quanto à resistência mecânica em tração, permeabilidade ao vapor de água, opacidade, gramatura, biodegradação e morfologia. A perspectiva do projeto é, além do desenvolvimento de um novo produto, contribuir para o crescimento da área de Engenharia de Materiais com o desenvolvimento de propostas com aplicações possíveis e que estejam aptas a atender os anseios da comunidade industrial e da sociedade como um todo.
Instituição/UF/País: Universidade Federal do Piauí - PI - Brasil
Vigência: 18/02/2019-28/02/2022

Tatiany Patrícia Romão Pompílio de Melo COORDENADOR(A)

Ciências Biológicas

Genética

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Título do Projeto:identificação de fatores moleculares determinantes para a infecção in vitro e in vivo de células de inseto pelo vírus zika
Resumo: O vírus Zika (ZIKV) (Flaviviridae, Flavivírus) tem apresentado destaque mundial nos recentes anos após seu último surto no Brasil em 2014. Seu genoma consiste de RNA fita simples de polaridade positiva que codifica para uma poliproteína que é clivada em proteínas estruturais e não estruturais. As proteínas estruturais são: capsídeo (C), membrana (precursora de M) e envelope (E). A proteína do envelope (E) é um importante determinante antigênico dos Flavivírus e tem uma ampla variedade de atividades biológicas tais como a interação com receptores de superfície celular, fusão de membranas e internalização viral na célula. Já as proteínas não estruturais são em número de sete e estão envolvidas em outras etapas do ciclo de infecção viral. Os estudos voltados para entender a biologia da infecção causada pelo ZIKV em diferentes tecidos e espécies de organismos ainda são escassos. Para invadir a célula hospedeira e iniciar a sua replicação, o vírus precisa penetrar no compartimento intracelular. O processo consiste em uma série intrincada de eventos altamente dinâmicos, fortemente coordenados, incluindo, entre outros, a ligação do vírus às células, o tráfico intracelular e a entrega da informação genética do vírus. Alguns membros da família Flaviviridae infectam uma variedade de vertebrados e mosquitos como exemplo o vírus do Oeste do Nilo (WNV), outros têm hospedeiros e vetores limitados como exemplo o vírus da Febre Amarela (YFV). Acredita-se que a capacidade desses vírus de infectar um ou mais hospedeiros e/ou vetores depende diretamente do reconhecimento de receptores específicos na superfície das células alvo pelas proteínas do envelope (E). Estudos tem demonstrado que as partículas flavivirais tem um contato inicial com a célula alvo através de sua concentração na superfície celular mediada por ligação da glicoproteína E com glicosaminoglicanos, tais como o proteoglicano heparan sulfato. Os receptores de lectina tipo C pertencem à uma família protéica bem caracterizada quanto a sua interação com a proteína E do Flavivírus Dengue (DENV), do vírus da Encefalite japonesa (JEV) e do vírus do Oeste do Nilo (WNV) em células de mamíferos e de mosquito. Estudos de caracterização dos receptores do vírus Dengue (DENV) em células de mosquito baseados em ensaios de ligação, ensaios de inibição da infecção mediada por anticorpos e RNAi possibilitaram a identificação de algumas proteínas candidatas a receptor, tais como Prohibitina, Glicoproteínas e Enolases. Apesar das intensas investigações, até o momento, a identidade de um receptor celular que determina a entrada do Flavivírus na célula alvo ainda não está esclarecida. A busca de receptores celulares que mediam a entrada do ZIKV à célula do seu hospedeiro invertebrado é uma área ativa de investigação. A base molecular da interação da proteína do envelope (E) viral com potenciais receptores celulares no Aedes aegypti, principal vetor incriminado na transmissão do ZIKV e em Aedes albopictus e Culex quinquefasciatus, potenciais vetores do Zika e de outros Flavivírus filogeneticamente relacionados, ainda é uma lacuna científica no âmbito dos estudos de interação arbovírus-vetor. A falta de conhecimentos sobre os mecanismos associados à infecção do mosquito vetor pelo ZIKV, incentivaram a presente proposta que visa investigar de forma comparativa a presença de receptores celulares do ZIKV no epitélio intestinal e salivar de fêmeas de Aedes aegypti, Ae. albopictus, C. quinquefasciatus e em linhagens celulares de inseto C6/36 (linhagem celular de Ae. albopictus susceptível à infecção viral e utilizada para detecção, propagação e análise de arbovírus) e Sf9 (linhagem celular de Spodoptera frugiperda não susceptível à infecção). Para isso, pretende-se clonar e expressar o cDNA que codifica para a proteína E do envelope do ZIKV em sistema de expressão procarioto e em sistema de expressão eucarioto. A partir da proteína recombinante pretende-se em seguida produzir anticorpos policlonais dirigidos contra a proteína E do ZIKV de forma a facilitar a detecção da proteína nativa em ensaios de ligação. Extratos protéicos de membranas apicais do epitélio intestinal e de glândula salivar de Ae. aegypti, Ae. albopictus e C. quinquefasciatus e de linhagem celular de inseto C6/36 e Sf9 serão então produzidos e utilizados em ensaios de ligação in vitro do tipo pull-down com a proteína E recombinante do Zika. Com estes ensaios pretende-se caracterizar proteínas ligantes à proteína E passíveis de serem identificadas por espectrometria de massas e análise in silico. Também pretende-se fazer uma análise transcriptômica comparativa de linhagens celulares de inseto frente à infecção do Zika a fim de identificar a regulação diferencial de genes e vias moleculares que possam desempenhar papel determinante na infecção/replicação viral. Os resultados gerados neste projeto devem direcionar novos caminhos de investigação quanto à especificidade e afinidade de ligação deste vírus com macromoléculas presentes no seu vetor e assim auxiliar no direcionamento de medidas de prevenção do ciclo de transmissão viral. Todos os esforços voltados para dissecar as interações moleculares entre o ZIKV e o seu mosquito vetor são uma tentativa de entender as mudanças que ocorrem durante a infecção e que serão úteis na identificação de moléculas que podem potencialmente aumentar ou suprimir a habilidade do vetor de se infectar e ou transmitir o vírus. O presente projeto irá estabelecer no Departamento de Entomologia do IAM um novo enfoque molecular de estudo e contribuirá para a consolidação e desenvolvimento de uma nova linha de pesquisa envolvendo estudos de interação patógeno-vetor, de relevância no contexto da saúde pública atual. Os objetivos que serão concretizados neste projeto representam um avanço no campo da biologia molecular aplicada à entomologia e contribuirão na identificação de novos alvos moleculares que poderão ser utilizados para o bloqueio da transmissão vetorial.
Instituição/UF/País: Fundação Oswaldo Cruz - PE - Brasil
Vigência: 15/05/2019-31/05/2022

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